PCR（聚合酶鏈式反應）幾(ji)乎(hu)是(shi)分(fen)子實驗室里最常見(jian)的(de)技術之一(yi)。但有時候，做著做著，條帶(dai)(dai)就是(shi)不上(shang)鏡：要么無條帶(dai)(dai)，要么全是(shi)拖尾(wei)，要么陰性對(dui)照還神奇地亮了……??
別急！今天我(wo)們就來盤點 PCR失敗的5個(ge)常見原因，并提(ti)供實(shi)用的解決辦法，幫你少踩坑。
1???模板DNA質量或濃(nong)度(du)不合適(shi)
?? 表(biao)現：無條(tiao)帶、條(tiao)帶過弱或拖尾。
????? 原因：DNA降解、雜質殘留(liu)，或者(zhe)濃度過低/過高(gao)。
? 解決辦法：
- 保證DNA純度（A260/A280 = 1.8–2.0）；
- 稀釋過濃模板；
- 植物/土壤等樣本建議用高純度提取試劑盒。
2???引物設計或濃度有問題
???表現：非特異性條帶、引物二聚體。
???原因：引物設計不合理，濃度過高/過低。
??解決辦法：
-
長度(du)18–25 bp，GC含(han)量40–60%；
-
避免3’端互補；
-
終濃(nong)度一般0.1–0.5 μM，必要時做梯度PCR優(you)化。
3???PCR體系或酶活性問題
???表現：完全無擴增或擴增效率低。
???原因：Taq酶失活、Mg2?濃度不合適、dNTP降解。
??解決辦法：
-
分裝保(bao)存酶(mei)，避免(mian)反復凍融；
-
優化Mg2?濃度（1.5–2.5 mM）；
-
用新鮮dNTP；
-
推薦選擇性能優異的PCR預混液??? 預混(hun)液中已優化了緩沖體系和酶活性，能(neng)顯著提升擴(kuo)增成(cheng)功率，減少反復調(diao)試的時間，非(fei)常適合(he)常規(gui)科研實驗(yan)。
4???實驗操作污染
???表現：陰(yin)性對照也出現條帶。
???原因：PCR產物殘留、移液槍污染、空氣中DNA污染。
??解決辦法：
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嚴格分區操作（提取區/體系(xi)配置區/產物(wu)分析區分開）；
-
用帶濾芯的槍頭；
-
定期清(qing)潔(jie)實(shi)驗(yan)臺(tai)，使用核酸去(qu)除劑。
5???循環條件設置不當
???表現：條帶模糊、非特異性擴增或無結果。
???原因：退火溫度過低/過高、延伸時間不足、循環數過多。
??解決辦法：
-
根據(ju)引(yin)物Tm值設置退(tui)火溫度；
-
延(yan)伸時間約 1 kb/min；
-
循環數控制在30–35次。
???總結
PCR失敗并不可怕，常見問題主要集中在?模板、引物、體系、操作和循環條件?這五個方面(mian)。逐一排查，總能找到原因。
而對于高校實驗室或科研人員來說，選擇一款高性能PCR預混液，往往能讓PCR事半(ban)功倍，節省(sheng)大量試(shi)錯(cuo)時間。
?? 科研路上，少(shao)一點彎(wan)路，多一點高效(xiao)！
| 貨號 | 產品名稱 | 適用場景 |
| P2141 | Super TaqMix | 常規PCR擴增 |
| P2111 | Super HIFI PCR Master Mix | 長片段高保真擴增 |
| P2121 |
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| P2091 | SYBR Green qPCR Mix | 染料法高特異性基因定量分析 |
| P2701 | Multiplex Probe qPCR Mix Plus U | 探針法多基因同時定量檢測 |
| R1081 | PowerScript RT SuperMix | 全預混高效RNA逆轉錄 |
| RP1001B | 2X One Step RT-PCR Mix | 快速逆轉錄與PCR擴增一體化 |
| V5007 | 2X One Step Prime RT-qPCR Mix | 快速靈敏的轉錄組基因定量檢測 |
| P9013 |
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| R1021 | TRAzol | 高效提取高質量RNA |
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