PCR檢(jian)測微量感染因子時，容易因為污染的而導致各種問(wen)題，因此，進行PCR操(cao)(cao)作時，操(cao)(cao)作人員應(ying)該(gai)嚴格遵(zun)守(shou)一些(xie)操(cao)(cao)作規(gui)程，最(zui)大程度(du)地(di)降(jiang)低(di)可能出現的PCR污染或杜絕污染的出現。

（1）劃分(fen)操作區(qu)：目前，普通PCR尚不能(neng)做到單(dan)(dan)人(ren)單(dan)(dan)管，實現完全閉管操作，但無論是否(fou)能(neng)夠達到單(dan)(dan)人(ren)單(dan)(dan)管，均(jun)要求(qiu)實驗(yan)操作在三個不同(tong)的(de)區(qu)域內進行(xing)，PCR的(de)前處理和(he)后(hou)處理要在不同(tong)的(de)隔離區(qu)內進行(xing)：

① 標本處理區，包括擴增摸板的制備；
② PCR擴增區，包括反應液的配制和PCR擴增；
③ 產物分析區，凝膠電泳分析，產物拍照及重組克隆的制備。
各工作區要有一定的隔離，操作器材專用，要有一定的方向性。如：標本制備→PCR擴增→產物分析→產物處理。
切記：產物分析區的產物及器材不要拿(na)到其他兩(liang)個工作區。

（2）分(fen)裝(zhuang)試(shi)劑：PCR擴(kuo)增所(suo)需要(yao)的試(shi)劑均應在裝(zhuang)有紫(zi)外燈的超(chao)凈工(gong)作(zuo)臺或負壓工(gong)作(zuo)臺配制(zhi)和分(fen)裝(zhuang)。所(suo)有的加樣器和吸頭需固定放于其中(zhong)，不能(neng)用(yong)來吸取擴(kuo)增后的DNA和其他來源的DNA：

① PCR用水應為高壓的雙蒸水；
② 引物和dNTP用高壓的雙蒸水在無PCR擴增產物區配制；
③ 引物和dNTP應分裝儲存，分裝時應標明時間，以備發生污染時查找原因。
(3) 實驗操作注意事項 盡管(guan)擴增(zeng)序列的殘留污(wu)染大(da)部分是假陽性反(fan)應的原(yuan)因，樣(yang)品(pin)間的交叉污(wu)染也是原(yuan)因之一(yi)。因此，不僅要在進行擴增(zeng)反(fan)應是謹慎認(ren)真，在樣(yang)品(pin)的收集、抽提和擴增(zeng)的所有環節都

應該注意：

① 戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套；
② 使用一次性吸頭，嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用，吸頭不要長時間暴露于空氣中，避免氣溶膠的污染；
③ 避免反應液飛濺，打開反應管時為避免此種情況，開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上，應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面；
④ 操作多份樣品時，制備反應混合液，先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好，然后分裝，這樣即可以減少操作，避免污染，又可以增加反應的精確度；
⑤ 最后加入反應模板，加入后蓋緊反應管；
⑥ 操作時設立陰陽性對照和空白對照，即可驗證PCR反應的可靠性，又可以協助判斷擴增系統的可信性；
⑦ 盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器，由于加樣器最容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染，最好使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器，至少PCR操作過程中加樣器應該專用，不能交叉使用，尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區；
⑧ 重復實(shi)驗，驗證結果，慎(shen)下結論。