Long Taq Mix

Cat. #：P2061，P2062

產品簡介

Long Taq Mix是2×濃縮的PCR擴增(zeng)(zeng)預(yu)混和(he)溶液，含有(you)Long Taq DNA聚合(he)酶(mei)、dNTPs、緩沖液等PCR擴增(zeng)(zeng)必(bi)需(xu)組分(fen)（模板(ban)與引物除外）。使(shi)用時，僅需(xu)在擴增(zeng)(zeng)體(ti)系中加(jia)(jia)入模板(ban)和(he)引物即可進行PCR，大(da)大(da)簡化操(cao)作過程，縮短操(cao)作時間，降低污染（加(jia)(jia)樣次數減少）。同時，由(you)于體(ti)系內含有(you)優化劑與增(zeng)(zeng)強劑，能夠顯著增(zeng)(zeng)強PCR擴增(zeng)(zeng)的靈(ling)敏(min)度(du)。

Long Taq DNA聚(ju)合(he)(he)酶(mei)是(shi)專門用(yong)于擴(kuo)增(zeng)(zeng)長片段(duan)的(de)嗜熱(re)DNA聚(ju)合(he)(he)酶(mei)，其保真性是(shi)普通Taq DNA聚(ju)合(he)(he)酶(mei)的(de)3倍左右。擴(kuo)增(zeng)(zeng)片段(duan)的(de)長度可(ke)達20 kb（簡(jian)單模(mo)板）。在擴(kuo)增(zeng)(zeng)復雜(za)模(mo)板（如GC-rich或重復序列）時，Long Taq DNA聚(ju)合(he)(he)酶(mei)的(de)擴(kuo)增(zeng)(zeng)效率顯著高(gao)于Taq DNA聚(ju)合(he)(he)酶(mei)。因此Long Taq DNA聚(ju)合(he)(he)酶(mei)適合(he)(he)＞5kb的(de)DNA片段(duan)及復雜(za)模(mo)板的(de)擴(kuo)增(zeng)(zeng)。延伸速度為20s/kb（70~75℃，簡(jian)單模(mo)板可(ke)達5s/kb）。擴(kuo)增(zeng)(zeng)產(chan)物具有兩(liang)種末(mo)端：平末(mo)端與3'-dA。

產品組成

本(ben)產品分含(han)體系中包(bao)(bao)(bao)含(han)溴酚(fen)(fen)(fen)藍(lan)、不含(han)溴酚(fen)(fen)(fen)藍(lan)兩(liang)(liang)類。體系中包(bao)(bao)(bao)含(han)溴酚(fen)(fen)(fen)藍(lan)的(de)(de)產品，PCR擴(kuo)增產物可直接電泳檢測。這(zhe)兩(liang)(liang)類產品的(de)(de)擴(kuo)增性能無差異(yi)。如無特別說明(ming)提供體系中包(bao)(bao)(bao)含(han)溴酚(fen)(fen)(fen)藍(lan)的(de)(de)包(bao)(bao)(bao)裝。

[1] PCR Enhancer主要通(tong)過降低DNA模(mo)板的(de)解(jie)鏈溫度(du)，促進DNA模(mo)板的(de)有(you)效(xiao)擴增，增加PCR反應的(de)靈(ling)敏度(du)和(he)特異性。可(ke)單(dan)獨訂(ding)購（Cat. #：P9041）。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純(chun)度檢測：經質量檢測，產品(pin)不含(han)脫(tuo)氧(yang)核(he)糖核(he)酸(suan)內(nei)切酶、脫(tuo)氧(yang)核(he)糖核(he)酸(suan)外切酶和核(he)糖核(he)酸(suan)酶污染。

功能檢(jian)測(ce)：PCR方法檢(jian)測(ce)無宿主殘余DNA，能有效擴增人(ren)基因(yin)組中的單拷(kao)貝基因(yin)。

應用舉例

1.?配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：

[1]?引物終濃度建議范圍：0.1-1 μM。特異性差時可降低(di)(di)濃度，效率低(di)(di)時可提高(gao)濃度。

[2]?不同模板最(zui)佳用量不同，部分DNA模板建議用量如下(xia)表（50 μl反應體系(xi)）。

[3]?可(ke)單(dan)獨訂(ding)購超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[4]?可單獨訂購25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）。

2.?設定反應程序進行PCR反應

[1]?退火溫度(du)應根(gen)據Tm值較低的引物來設。

[2]?延伸時間按20s/kb來設最佳（簡單模板可達5s/kb）。

3.?分析結果

反(fan)應產物可直(zhi)接進行(xing)瓊脂糖(tang)凝(ning)(ning)膠(jiao)電泳，通過凝(ning)(ning)膠(jiao)成像設備(bei)觀(guan)察目的(de)條(tiao)帶的(de)擴增(zeng)情況。如(ru)有需要，可進行(xing)割膠(jiao)回收。

無產物或產物量少的改進措施有：1調整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分，需要高倍稀釋（1:；10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可提高產量。

操作注意事項

1?室溫下Long Taq DNA聚合酶有一定的活(huo)性，為避免發(fa)生非特異(yi)性擴增，請(qing)于冰上配置(zhi)反應體系(xi)，并且(qie)最后添加模(mo)板DNA。

2 Long Taq Mix的擴增產(chan)物有兩種末端(duan)：平末端(duan)和(he)3'-dA突出末端(duan)。如要進行TA克(ke)隆(long)，請先進行加A反(fan)應(ying)，以提(ti)高克(ke)隆(long)效率(lv)。（加A反(fan)應(ying)：參考(kao)如下體系，72℃，15-30min）

3 Long Taq Mix既可擴增長片(pian)段(duan)的(de)DNA，也可擴增小(xiao)片(pian)段(duan)（幾百bp）的(de)DNA。

4 PCR Enhancer主要在Long Taq Mix擴(kuo)(kuo)增無結果(guo)或擴(kuo)(kuo)增效果(guo)不好時使(shi)用。使(shi)用后退(tui)火溫(wen)度需(xu)在原(yuan)溫(wen)度上降低(di)2-3℃，否則(ze)會降低(di)PCR效率，建議使(shi)用Tm值較高的引物。PCR Enhancer能夠(gou)與所有的耐熱DNA聚(ju)合酶共(gong)同(tong)作用。

引物設計注意事項

引物長度一般在15-30個堿基之間；上(shang)下(xia)游引物3’末端避免(mian)互補，避免(mian)出(chu)現(xian)3個以上(shang)重(zhong)復的(de)G或C，或出(chu)現(xian)發夾結構，否(fou)則(ze)會產生非(fei)特異(yi)性擴增(zeng)；GC含(han)量控制在40-60%，且上(shang)下(xia)游引物GC含(han)量盡量接近；Tm值(zhi)控制在55-65℃之間，且上(shang)下(xia)游引物Tm值(zhi)盡量接近，額外附加序列（酶切位點、修(xiu)飾等）是非(fei)模板匹配序列，不參與Tm值(zhi)計(ji)算。

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