FS? Mix Direct for Blood

Cat. #：P2071a，P2072a

產品簡介

FS??Mix Direct for Blood是適合(he)全血(xue)模(mo)(mo)板(ban)擴(kuo)(kuo)增(zeng)的2×濃(nong)縮快速高(gao)效PCR預混合(he)溶液(ye)，含有FS??Taq DNA聚合(he)酶、dNTP混合(he)物(wu)、緩沖液(ye)等PCR擴(kuo)(kuo)增(zeng)必需組分（模(mo)(mo)板(ban)與引物(wu)除外）。使(shi)用時(shi)，僅需在(zai)擴(kuo)(kuo)增(zeng)體(ti)(ti)系中加入模(mo)(mo)板(ban)和引物(wu)即可進行PCR，從(cong)而可以極(ji)大地(di)簡(jian)化操作過程，縮短操作時(shi)間，降低污染(ran)（加樣次(ci)數減少(shao)）。FS??Mix Direct for Blood的反(fan)應體(ti)(ti)系經過優化處(chu)理，高(gao)靈敏度的FS??Taq DNA聚合(he)酶確保處(chu)理液(ye)中的微量樣本(ben)得到高(gao)效擴(kuo)(kuo)增(zeng)。本(ben)產品不(bu)用進行繁瑣的DNA提(ti)取，最大限度減少(shao)實驗誤差和交(jiao)叉(cha)污染(ran)；同時(shi)依(yi)靠特殊的緩沖體(ti)(ti)系增(zeng)強PCR擴(kuo)(kuo)增(zeng)的特異(yi)性，保證(zheng)擴(kuo)(kuo)增(zeng)效果(guo)與DNA模(mo)(mo)板(ban)擴(kuo)(kuo)增(zeng)效果(guo)同樣可靠。

FS??Taq DNA聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)是根據蛋白工程原理，以(yi)Taq DNA聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)為基(ji)礎，研發設計的新(xin)一(yi)代DNA聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)。本產(chan)品具有(you)類似KOD酶(mei)(mei)(mei)的快速擴增能力，延伸速度為20s/kb（70~75℃，簡單模板可(ke)(ke)達5s/kb）。是普(pu)通(tong)Taq DNA聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)的3倍，可(ke)(ke)縮短(duan)一(yi)半以(yi)上(shang)的擴增時間；同時具備Taq DNA聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)擴增效率高、適(shi)應性(xing)廣等優點。FS??Taq DNA聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)使用方法與(yu)普(pu)通(tong)Taq DNA聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)基(ji)本相同，只需注意(yi)適(shi)當縮短(duan)延伸時間。該酶(mei)(mei)(mei)具有(you)5'→3'聚(ju)(ju)(ju)(ju)合(he)酶(mei)(mei)(mei)活(huo)性(xing)，無(wu)3'→5'外切酶(mei)(mei)(mei)活(huo)性(xing)。擴增產(chan)物具有(you)3'-dA突出端，可(ke)(ke)直接用于TA克隆。

產品組成

本產(chan)品分體(ti)系中包(bao)(bao)含(han)溴(xiu)酚(fen)藍(lan)、不含(han)溴(xiu)酚(fen)藍(lan)兩類。體(ti)系中包(bao)(bao)含(han)溴(xiu)酚(fen)藍(lan)的(de)(de)產(chan)品，PCR擴增(zeng)產(chan)物(wu)可直接電(dian)泳檢測。這(zhe)兩類產(chan)品的(de)(de)擴增(zeng)性能無差異。如(ru)無特別說明提(ti)供體(ti)系中包(bao)(bao)含(han)溴(xiu)酚(fen)藍(lan)的(de)(de)包(bao)(bao)裝。

保存條件

-20℃保存2年。

質量控制

純度檢(jian)測：經質(zhi)量檢(jian)測，產品不含脫氧核(he)糖(tang)核(he)酸(suan)(suan)內(nei)切酶、脫氧核(he)糖(tang)核(he)酸(suan)(suan)外切酶和核(he)糖(tang)核(he)酸(suan)(suan)酶污染。

功(gong)能(neng)檢測(ce)：PCR方法檢測(ce)無宿主(zhu)殘余DNA，能(neng)有效(xiao)擴增人基因組中的單拷貝基因。

應用舉例

1.?配制反應體系

請于冰上配置反應體系，體系大小與組分用量與添加順序可調整：

[1]?引物終(zhong)濃(nong)度(du)建議范圍：0.1-1 μM。特異性(xing)差時可降低濃(nong)度(du)，效率(lv)低時可提高濃(nong)度(du)。

[2]?可單(dan)獨訂(ding)購超純水（Cat. #：P9021/P9022/P9023）。

[3]?可單獨訂購25mM MgCl₂（Cat. #：P9031）和PCR Enhancer（Cat. #：P9041）。

2.?設定反應程序進行PCR反應

大多數模(mo)板的快速擴(kuo)增條(tiao)件(jian)：

[1]?退(tui)火溫度應根據Tm值較低的引物(wu)來設。

[2]?延伸(shen)時間按(an)20 sec/kb來設最佳。

1kb簡單模板的快速(su)擴增條件：

由于1kb簡單模板的二級結構簡單，且長度較(jiao)短，可(ke)同時縮短變性、退火時間至15s，以實現快速擴增。

3.?分析結果

反應產物可直接進行瓊脂糖凝膠電泳，通過凝膠成像設備觀察目的條帶的擴增情況。如有需要，可進行割膠回收。無產物或產物量少的改進措施有：1調整退火溫度；2減少抑制劑的影響，如提取的基因組DNA中含有抑制擴增的成分，需要高倍稀釋（1: 10000）后使用；3采用乙醇沉降洗脫，提高模板DNA的純度；4使用PCR添加劑，如PCR Enhancer（Cat. #：P9041）、MgCl₂（Cat. #：P9031）等可(ke)提高產(chan)量。

操作注意事項

室溫(wen)下FS??Taq DNA聚合酶(mei)有一定的活性，為避(bi)免發生非特(te)異性擴增，請于冰上配置反應體系(xi)，并且(qie)最后添(tian)加模(mo)板DNA。

本產品可直接(jie)從新鮮(xian)或(huo)(huo)凍存(cun)的(de)全血、抗凝全血（EDTA或(huo)(huo)其他抗凝劑）、FTA卡(ka)等樣本擴增DNA。可用于人(ren)血或(huo)(huo)其他動物血液(ye)。

延(yan)伸(shen)時(shi)間視片(pian)段長度而定。一般情況，≤500bp目的片(pian)段延(yan)伸(shen)15s，500bp-1kb延(yan)伸(shen)20s，＞1kb延(yan)伸(shen)時(shi)間按20s/kb計算。

FS? Taq DNA聚合酶具有脫(tuo)氧(yang)核苷(gan)酸轉移酶活性，因此在PCR產(chan)物3’末端通(tong)常會加(jia)上一個多余的脫(tuo)氧(yang)腺嘌呤(ling)核苷(gan)，可進行(xing)TA克(ke)隆。

FS??Mix Direct for Blood也(ye)可采用常規程(cheng)序(xu)擴增，擴增產(chan)物純化后可直接用于測序(xu)反應(ying)。

為方便加(jia)樣，全血可用PBS稀釋(shi)后加(jia)樣，模板用量根據樣本(ben)、實驗要求而定。

引物設計注意事項

引(yin)(yin)(yin)物長度一般在15-30個(ge)(ge)堿基之(zhi)間(jian)；上(shang)下游引(yin)(yin)(yin)物3’末端避(bi)免互補，避(bi)免出(chu)現3個(ge)(ge)以(yi)上(shang)重復的G或C，或出(chu)現發(fa)夾結構，否則(ze)會產生(sheng)非特異(yi)性擴增；GC含(han)量(liang)(liang)控制(zhi)在40-60%，且(qie)上(shang)下游引(yin)(yin)(yin)物GC含(han)量(liang)(liang)盡量(liang)(liang)接近(jin)；Tm值(zhi)控制(zhi)在55-65℃之(zhi)間(jian)，且(qie)上(shang)下游引(yin)(yin)(yin)物Tm值(zhi)盡量(liang)(liang)接近(jin)，額外附加序列(lie)（酶(mei)切位點、修飾等）是非模板匹配序列(lie)，不參與Tm值(zhi)計算。

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