RT-PCR Mix for qPCR（預混型逆轉錄試劑盒）

貨號：R1031 ??規格：100次（20?μl反應體(ti)系）

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產品說明

RT-PCR Mix for qPCR是(shi)預混(hun)型逆(ni)轉錄反(fan)(fan)(fan)應(ying)試劑(ji)盒(he)，操作簡便，可(ke)(ke)快速高效完成(cheng)逆(ni)轉錄反(fan)(fan)(fan)應(ying)。其(qi)中(zhong)Enzyme Mix含有高效逆(ni)轉錄酶和熱(re)敏型DNase，一步完成(cheng)基因組DNA的(de)(de)(de)(de)(de)清除(chu)以(yi)及(ji)RNA的(de)(de)(de)(de)(de)逆(ni)轉錄反(fan)(fan)(fan)應(ying)，RT Buffer包含逆(ni)轉錄反(fan)(fan)(fan)應(ying)所需(xu)的(de)(de)(de)(de)(de)其(qi)他組分，無需(xu)分步多次(ci)加樣(yang)，降低了(le)樣(yang)品污染的(de)(de)(de)(de)(de)風險。同時，本試劑(ji)盒(he)配備了(le)Control Mix，用于陰性對(dui)照反(fan)(fan)(fan)應(ying)，檢驗(yan)RNA模板(ban)中(zhong)是(shi)否有基因組DNA殘留。本試劑(ji)盒(he)的(de)(de)(de)(de)(de)逆(ni)轉錄產物對(dui)染料法(fa)和探針(zhen)法(fa)熒光定(ding)量PCR反(fan)(fan)(fan)應(ying)均有很(hen)好的(de)(de)(de)(de)(de)兼容性，可(ke)(ke)進行精準的(de)(de)(de)(de)(de)基因表達(da)分析。

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產品組分

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保存條件

各組分均-20℃保存(cun)，并避免(mian)反復凍融。

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適用范圍

第一鏈cDNA?合成

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注意事項

l?本品含有熱敏型DNase，請于冰上使用(yong)本品各組分。

l?為(wei)保證成分均(jun)勻(yun)，請(qing)將Enzyme Mix、5X RT Buffer及Control Mix分別瞬時離心、吹打混勻(yun)后再吸(xi)取(qu)使(shi)用。

l?在操作過程中(zhong)，注(zhu)意防止引入RNase導致RNA降(jiang)解。RNA最(zui)好保存于-70℃，避免反復凍融。

l?cDNA產(chan)物(wu)應置于-20℃或以下(xia)保存，避免反(fan)復凍融。

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操作步驟

1.?配制反應體系

按以下體系，在冰(bing)浴的(de)無菌(jun)無酶離(li)心管中配制反應混合(he)液：

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陰性對照反應（可選）

即(ji)不加逆(ni)轉錄酶的反應，產物(wu)用(yong)于在(zai)qPCR中(zhong)作為陰(yin)性對照，檢(jian)驗模板RNA中(zhong)是(shi)否有基(ji)因組DNA殘(can)留(liu)

按以下體系(xi)，在冰浴(yu)的(de)無(wu)菌(jun)無(wu)酶離心(xin)管中配(pei)制反應混合液：

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2.?進行逆轉錄反應

將上述混合液(ye)吹(chui)打(da)混勻，瞬時(shi)離心收集至管底。按以(yi)下程序，在PCR儀中進行(xing)反應：

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3. qPCR反應及cDNA保存

cDNA產物可稀釋后立即進行染料(liao)法(fa)或探針法(fa)qPCR反(fan)(fan)應。若使用未稀釋的(de)(de)cDNA原(yuan)液，則體積不能超過反(fan)(fan)應體系的(de)(de)1/10，以避免(mian)抑制反(fan)(fan)應效率。長(chang)期保存cDNA產物應于-20℃或以下環境中，并避免(mian)反(fan)(fan)復凍融。

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